庆大霉素一般属于氨基糖苷类细菌抑制剂，主要通过抑制细菌蛋白质的合成发挥抗菌作用。这类抗生素对多种革兰氏阴性菌具有较好的杀菌效果，也可与青霉素类联用增强对部分阳性菌的疗效。
庆大霉素的作用机制是特异性地结合细菌核糖体的30S亚基，干扰蛋白质合成的起始阶段并导致错误遗传信息的翻译。其抗菌谱覆盖大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌等常见革兰氏阴性致病菌，对金黄色葡萄球菌等部分革兰氏阳性菌也有抑制作用。临床上常用于治疗泌尿系统感染、腹腔感染、败血症等疾病，对烧伤创面感染、骨髓炎等局部感染可采用外用剂型。
使用该药物需严格遵医嘱，因其具有耳毒性和肾毒性风险，治疗期间需监测听力和肾功能。细菌易对此类药物产生耐药性，故不推荐作为轻度感染的首选用药。建议在药敏试验指导下合理使用，避免与其他耳毒性药物联用，儿童、孕妇及肾功能不全者应慎用。