内关穴位于前臂前区，腕掌侧远端横纹上2寸，掌长肌腱与桡侧腕屈肌腱之间。触诊时更易在掌长肌腱的桡侧触及该穴位。部分人群的掌长肌腱可能存在解剖变异或先天性缺失，此时可参考桡侧腕屈肌腱的位置进行定位。
内关穴的定位需以腕横纹为基准，沿前臂中线向肘部方向量取约三横指宽度即为2寸。触诊时嘱患者握拳并屈腕，此时掌长肌腱和桡侧腕屈肌腱会明显隆起。由于桡侧腕屈肌腱较粗大且位置表浅，在大多数情况下，内关穴更靠近桡侧腕屈肌腱的尺侧缘，即掌长肌腱的桡侧缘。对于掌长肌腱发育不明显的个体，通过触摸桡侧腕屈肌腱与周围组织的间隙也能准确定位。
日常进行穴位按摩时，建议采用拇指指腹以适度压力按压，配合旋转揉动的手法。若需进行针灸治疗，应前往正规医疗机构由专业医师操作，避免自行施针造成神经或血管损伤。穴位刺激后出现局部酸胀感属于正常反应，但若出现持续疼痛或麻木需及时停止操作。