核酸检测的正确操作步骤通常包括样本采集、样本保存与运输、实验室检测、结果分析以及报告发放等环节，需严格按照规范执行。
1、样本采集
通常采用鼻咽拭子或口咽拭子进行采集。操作者需穿戴防护装备，指导被检者头部微仰，将拭子沿鼻腔或口腔缓慢插入至指定深度，旋转数秒后取出，立即放入含有病毒保存液的采样管中。采集过程中需避免触及其他部位，防止样本污染。
2、样本保存与运输
采样管需标注被检者信息，密封后置于2-8℃环境暂存，并在4小时内送至实验室。若运输时间超过24小时，需在-70℃以下低温保存。运输过程中需使用三层包装系统，确保生物安全性。
3、实验室检测
检测人员在生物安全柜内进行核酸提取，使用实时荧光定量PCR技术对病毒特异性基因片段进行扩增。需设置阳性对照、阴性对照和内部质控，排除试剂污染或操作失误。
4、结果分析
根据扩增曲线和CT值判定结果。若靶标基因（如ORF1ab、N基因）均呈典型S型扩增曲线且CT值≤40，则判断为阳性；若CT值在灰区（如37-40），需重新采样复检。阴性结果需满足内标正常且靶标无扩增。
5、报告发放
检测完成后需双人核对被检者信息、检测结果和实验数据，生成电子或纸质报告。阳性结果需立即上报疾控部门，并在12小时内通过指定渠道反馈。
整个流程需由经过专业培训的人员在二级生物安全实验室完成，操作中需严格执行防污染措施。若发现检测结果与临床症状不符，建议重新采样并使用不同品牌试剂复测。检测机构应定期参加室间质评，确保结果准确性。